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        免疫診斷中 如何正確使用阻斷劑

        時間:2021年06月13日

        近年來隨著國內診斷試劑廠家技術上的飛速發展,國內診斷試劑盒的開發越來越多,免疫診斷已成為主流診斷技術,為了生產出高靈敏度和高特異性的試劑,最關鍵的因素是選擇具有與靶分子的高特異性結合的抗體或抗原。據報道免疫分析中的假陽性、假陰性或其他的特異性干擾, 尤其對雙抗體夾心法測定干擾明顯。干擾物有:血漿、血清蛋白(類風濕性因子、結合蛋白)、嗜異性抗體(Id)、人抗動物抗體(HAAA)和藥物及其導致的代謝物等,尤其是后兩種抗體干擾最多。實際試驗過程中,正確地使用阻斷劑有助于提高檢測的靈敏度和特異性。這些阻斷劑的使用可以有效地減少非特異性結合以增加信噪比,提高診斷試劑的臨床使用性能。西寶生物作為一家診斷原料綜合供應商可提供用于診斷試劑盒開發用的各種阻斷劑產品。咨詢熱線:18154252875 


         阻斷劑(blocker),是一類能應用于在體外診斷試劑開發過程中,以達到減少來自患者樣本中的蛋白質干擾或者試驗過程中的其他因素影響并由此可能造成的假陽性,假陰性的錯誤檢測結果的物料的統稱。阻斷劑能夠阻斷試驗過程中出現的干擾物,分為被動阻斷劑和主動阻斷劑。

         目前有兩種主要的阻斷劑: 

        1.傳統阻斷劑(被動阻斷劑) 傳統的被動阻斷法,使用非特異性物質(鼠IgG,鼠血清,非特異性的單克隆抗體,聚合IgG等),阻斷人類異嗜性抗體的結合。所有方法的阻斷效果皆依賴人類異嗜性抗體的親合力。通常人類異嗜性抗體的親合力к值在105-106范圍內。 常見的HAMA類阻斷劑只阻斷一種人抗特定動物抗體的活性(如人類抗鼠抗體),通常為非針對目標分析物的正常血清、正常1gG、單克隆抗體等。 這類“被動阻斷劑”被過量地加入樣本中,使得樣本中的種屬特異性抗體優先于低濃度的分析物與之結合。 這類試劑用途有限,因為僅能排除異嗜性干擾的一部分,而異嗜性干擾涉及許多成分。 人們經常發現,鼠IgG在一個雙單抗夾心法檢測體系中,只能糾正部分異嗜性干擾。     2.異嗜性抗體阻斷劑(HBR)- 主動阻斷劑 這種制劑可排除各種異嗜性干擾 內含“主動阻斷劑”,對造成干擾的異嗜性抗體具特異性結合力,只需低濃度即可高效阻斷,將影響減到最低。 免疫檢測中的非特異性反應可由多種原因引起,其中最常見的內源性干擾物主要為嗜異性抗體(Heterophilic antibodies)和人抗動物抗體(Human anti-animal antibodies),廣泛存在于人的血清當中。這種抗體可與其它物種的免疫球蛋白(抗體)結合,例如免疫診斷試劑中采用的動物抗體,造成假陽性,干擾免疫分析結果的判斷。隨著免疫診斷中雙抗體夾心法的普遍采用,這種內源性干擾物導致的非特異反應越來越受到專業人士的關注。 哪些項目需要使用阻斷劑 圖片 容易受到干擾的檢測包括雙抗體夾心抗原檢測,競爭性檢測和IgM捕獲檢測。文獻中報道過的典型的例子包括對ToRCH,CEA,CA-125,CK-MB,LH,FSH,prolactin,TSH,AFP,cardiac troponin I (cTnI)和HCG等的檢測。常見的能引起雙抗體夾心檢測抗原和競爭法檢測偏差的主要是異嗜性抗體(HA)的干擾,HA是一類結合力弱的天然抗體,可與來自不同物種的免疫球蛋白反應,這些物種包括小鼠,山羊,兔子,綿羊和雞。在診斷檢測中,HA可以結合多種類型的無關抗原,從而干擾抗原—抗體的特異性結合反應。人抗小鼠抗體(HAMA)的干擾是HA干擾的一種類型,它可以特異性的結合小鼠抗體。因為小鼠單克隆在免疫檢測的商業診斷中應用非常廣泛,所以HAMA的干擾經常會遇到。例如人自身抗體類風濕因子(RF),可以與人自身的免疫球蛋白(IG)結合,同時也可以與動物免疫球蛋白交叉反應,可引起與HA/HAMA干擾類似的RF干擾。通常同種型(Fc 區域)特異性的HA干擾比異種型(Fab或結合位點)特異性的HA更普遍。 Seebio?HBR-H1阻斷劑的優勢 圖片 Seebio?RHBR-H1是一種新型試劑,經過專門設計可解決免疫測定中的異源抗體干擾問題。它是專門針對異源抗體以中和其干擾的免疫球蛋白的獨特配方。相對于傳統的阻斷法HBR以完全不同的方法來實現阻斷。HBR能特異性結合人類異嗜性抗體,產生位阻效應,阻止干擾。 1.通用試劑可用于所有的雙抗夾心法項目中; 2.純度高達90%; 3.不干擾人血清中分析物的加入與抗原; 4.不干擾真陽性樣本的稀釋線性; 5.批次間重復性高; 6.只需少量的蛋白質作為封閉,不減弱檢測信號; 7.低濃度、高效能的,不會產生劑量-反應曲線; 8.專為體外診斷試劑盒研發。

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